Infection of the central nervous system with dengue virus 3 genotype I causing neurological manifestations in Brazil

Abstract: A case of dengue virus 3 (DENV-3) genotype I infection with neurological manifestations occurred in Belo Horizonte, Minas Gerais in October 2012. The serotype was detected by PCR, and the genotype was assessed by sequencing and phylogenetic analysis of the C-prM region. The virus causing neurological manifestations clustered with other sequences of DENV-3 genotype I. Because neurological manifestations of DENV are possibly misdiagnosed in Brazil, this study serves as an alert of the importance of DENV diagnoses in CNS infections.

Study of Vaccinia and Cowpox viruses' replication in Rac1-N17 dominant-negative cells

Interfering with cellular signal transduction pathways is a common strategy used by many viruses to create a propitious intracellular environment for an efficient replication. Our group has been studying cellular signalling pathways activated by the orthopoxviruses Vaccinia (VACV) and Cowpox (CPXV) and their significance to viral replication. In the present study our aim was to investigate whether the GTPase Rac1 was an upstream signal that led to the activation of MEK/ERK1/2, JNK1/2 or Akt pathways upon VACV or CPXV' infections. Therefore, we generated stable murine fibroblasts exhibiting negative dominance to Rac1-N17 to evaluate viral growth and the phosphorylation status of ERK1/2, JNK1/2 and Akt. Our results demonstrated that VACV replication, but not CPXV, was affected in dominant-negative (DN) Rac1-N17 cell lines in which viral yield was reduced in about 10-fold. Viral late gene expression, but not early, was also reduced. Furthermore, our data showed that Akt phosphorylation was diminished upon VACV infection in DN Rac1-N17 cells, suggesting that Rac1 participates in the phosphoinositide-3 kinase pathway leading to the activation of Akt. In conclusion, our results indicate that while Rac1 indeed plays a role in VACV biology, perhaps another GTPase may be involved in CPXV replication.

Relação entre a qualidade de amostras de escarro e o diagnóstico de micobacterioses por PCR / Relation between sputum samples quality and (PCR) for the diagnosis of micobacterioses

O objetivo do estudo foi relacionar a quantidade de células, a presença de leucócitos e outros elementos no escarro com a positividade da reação de PCR, para diagnóstico de micobacterioses. Trinta e nove amostras positivas por baciloscopia para bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR), ou positivas em cultura em meio de Lõwenstein-Jensen foram analisadas pelo método de coloração de Gram, para avaliação da biota e quantificação de células e leucócitos. Foram também submetidas à reação de PCR, para identificação de micobactérias.As amostras, de acordo com os resultados do Gram, foram classificadas como: ótima, boa, aceitável, ruim ou muito ruim. Do total de amostras analisadas, 26 (66,7%) apresentaram PCR positiva concordando com a baciloscopia, 12 (30,7%) PCR negativa e baciloscopia ou cultura positiva e uma (2,6%) amostra não pôde ter seu resultado avaliado, pois o DNA apresentou-se degradado após sucessivas extrações. Dentre as amostras com PCR negativo e baciloscopia ou cultura positiva, 9 (23,0%) apresentaram qualidade muito ruim no Gram, 2 (5,2%) qualidade ruim e 1 (2,6%) apresentou qualidade aceitável. Os resultados mostraram que a qualidade do escarro influencia diretamente na positividade da PCR e que, quanto mais representativa do trato respiratório inferior for a amostra, melhor será o rendimento da detecção molecular...

Dominant culturable bacterial microbiota in the digestive tract of the American black vulture (Coragyps atratus Bechstein 1793) and search for antagonistic substances

As bactérias anaeróbias estritas e facultativas cultiváveis do trato digestivo de seis urubus (Coragyps atratus Bechstein 1793) foram isoladas e identificadas. Após a captura, as aves receberam uma alimentacão de baixa contaminacão durante uma semana para eliminar possíveis microorganismos alóctonos. A seguir, amostras colhidas na língua, estomago e intestinos foram pesadas, submetidas a diluicões decimais numa câmara anaeróbia, inoculadas em meios de cultura e incubadas em aerobiose e anaerobiose a 37ºC para enumeracão, isolamento e identificacão. As bactérias isoladas foram usadas posteriormente como produtoras e reveladoras para detectar possíveis fenômenos de antagonismo. A populacão bacteriana total ao longo do trato digestivo variou de 3,46 n 0,39 log UFC/g no estômago até 10,75 n 0,37 log UFC/g no intestino distal. Algumas bactérias foram isoladas pela primeira vez do trato digestivo de C. atratus: Actinomyces bovis, Lactobacillus cellobiosus, Micrococcus luteus, Neisseria sicca, Clostridium bifermentans, Enterobacter agglomerans, Peptostreptococcus sp., Sarcina sp., Serratia odorifera, and Shigella flexneri. Associacões entre microorganismos foram observadas durante o isolamento em dois casos, um envolvendo A. bovis e N. sicca, e o outro envolvendo A. bovis e um bastonete Gram-negativo. Hetero-, iso- e autoantagonismos foram observados, sugerindo um papel ecológico para esses microorganismos em termos de autocontrole populacional e de barreira ambiental no trato digestivo dessas aves.

Genetic variability of HIV-1 isolates from Minas Gerais, Brazil

We report results of nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the env gene of 11 HIV-1 isolates, in Belo Horizonte, Brazil. Ten isolates belonged to HIV-1 subtype B and one was a probable B/F mosaic. This putative B/F recombinant is similar but not identical in its nucleotide sequence to other B/F mosaics described in Brazil.

Preservaçäo de interferon de membrana amniótica humana / Preservation of the human amniotic membrane interferon

Foram realizadas investigaçöessobre a presença do interferon de membrana amniótica humana (IFN-AM) a fim de permitir pesquisas posteriores a respeito de sua purificaçäo, propriedades químicas e biológicas e ensaios clínicos.Testes de inativaçäo rápida foram realizados para ensejar resultados imediatos.IFN-AM foi preparado pela infecçäo de âmnios pelo vírus da doença de Newcastle.A atividade anti-vírica do IFN-AM foi determinada em um sistema de células Vero-vírus da encefalomiocardite de camundongo ou vírus Sindbis.Para os testes de inativaçäo, preparaçöes de IFN-AM contendo 0;1 e 2 por cento de soro de carneiro foram aquecidas em temperaturas de 35ºC a 100ºC em tempos variáveis e foi medida a atividade antivírica residual.Destes dados, foi calculada a constante de Arrhenius de queda de atividade pelo calor, que foi representada graficamente contra a temperatura absoluta.Os dados de temperaturas altas(45ºC e acima) foram extrapolados para temperaturas baixas(37ºC e abaixo).Os resultados mostraram que o IFN-AM preservou-se melhor em pH 2 em presença de soro.Os dados obtidos nas temperaturas de 45º, 55º e 65ºC permitiram o cálculo de constante de Arrhenius de queda para baixas temperaturas por extrapolaçäo.A -4, 2ºC näo deverá ocorrer perda de ativadade do IFN-AM.

A concentraçäo de interferon humano de membranas amnióticas: I- métodos fácicos / The concentration of human amniotic membrane interferon: I physical methods

A concentraçäo de preparaçöes de interferon humano de membranas amnióticas (IFN-MA) por métodos fásicos foi investigada. As preparaçöes foram obtidas a partir de âmnios infectados com o vírus da doença de Newcastle e o seu título de atividade anti-vírica foi determinado em células Vero, tendo como desafio o vírus da encefalomiocardite de camundongo ou o vírus Sindbis. A concentraçäo por diálise contra pressäo negativa, com as preparaçöes em pH2, mostrou recuperaçöes de IFN acima de 50//. O método, apesar de bastante lento, foi considerado conveniente para pequenos volumes (até 100ml). A diálise contra substância higroscápica (aquacide) na qual a água das preparaçöes retiradas por substância colocada externamente à membrana de diálise foi satisfatório, permitindo concentraçöes rápidas, de 6 a 10 vezes, com recuperaçöes acima de 50//, sobretudo se o material fosse dialisado posteriormente em água acidulada. A filtraçäo molecular utilizando membranas Millipore PSAC ou PTGC e Amicon näo concentradas previamente pela precipitaçäo com ácido tricloroáctico permitiu a concentraçäo sem perdas do IFN-MA

Purification of human anmiotic membrane interferon by affinity chromatography

A purificaçäo do interferon humano de membranas amnióticas foi realizada para se obter preparaçöes purificadas para sua caracterizaçäo físico-química, estudo de suas atividades biológicas e ensaios terapêuticos. O interferon foi produzido em doença de Newcastle ou o vírus Sendai. A determinaçäo da atividade anti-vírica foi feita em células Vero infectadas com o vírus da encefalomiocardite de camundongo. As preparaçöes de interferon foram concentradas por precipitaçäo por ácido tricloroactivo e cromatografadas em "Blue-Sepharose- concanavalina A, Sepharose ligada ao dipeptídeo triptofnio (trf) - triptofânio ao dipeptídeo triptofânio-tirosina (tyr). Com a "Blue-Sepharose", o pH ótimo de ligaçäo do interferon foi 5,4. A aplicaçäo em batelada mostrou que foram ligadas 37.000 unidades de interferon por ml de gel, sendo portanto, mais eficiente que a aplicaçäo em coluna, na qual somente foram ligadas 17.750 unidades por ml de gel. As fraçöes do pico de atividade foram purificadas 274 vezes, com 12//de recuperaçäo do interferon em um experimento, com um total de 78//de recuperaçäo e um fator de purificaçäo atingido foi de apenas 6,7; os ligantes Sepharose trp-trp e trp-tyr mostraram uma ligaçäo baixa do interferon, menor que 10.000 unidades por ml de gel

Produçäo de interferon humano de membranas amnióticas em microtécnica / Production of human amniotic interferon by microtechnique

Foi desenvolvido um sistema de produçäo de interferon humano de membranas amnióticas (IFN-MA) em microtécnica. Fragmentos de âmnio de 1,4 ou 2,2cm de diâmetro, em placas de microtécnica (24 câmaras), foram infectados por vírus Sendai e o IFN-MA resultante foi titulado. Maiores títulos (12.800 e 13.000 unidades por ml) foram obtidos quando utilizadas quantidades de meio de 0,5ml e 1,0ml); 6,4 unidades hemaglutinantes do vírus Sendai e um fragmento por câmara. Níveis de IFN-MA mais consistentes e altos foram alcançados na regiäo coriônica do âmnio (6.000 a 9.600 unidades/ml) quando comparados com aqueles da regiäo umbilical (860 a 2.500 unidades/ml) e reflexa (200 a 6.500 unidades/ml). O sistema com fragmentos de 2,2cm de diâmetro produziu, em média, quantidades de interferon/ml superiores (9.300 unidades/ml) quando comparado ao da produçäo do âmnio total (2.200 unidades/ml). Apesar da variabilidade nos títulos produzidos individualmente pelos fragmentos de 2,2cm de diâmetro, devido a econômia de tempo e de materiais e aos altos níveis de IFN resultantes, a microtécnica poderá se empregada quando um grande número de variáveis for investigada